上海恒遠(yuǎn)公司的吳講到：ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)過(guò)程中我們會(huì)遇到各種各樣的問(wèn)題，上海恒遠(yuǎn)公司吳在這跟老師們說(shuō)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到問(wèn)題不要慌，不要緊張，我們首先要找到問(wèn)題的出發(fā)點(diǎn)，是試劑盒的問(wèn)題還是操作時(shí)漏了一個(gè)步驟沒(méi)做等，您不知道可以來(lái)電詢(xún)問(wèn)我公司的技術(shù)人員，下面就讓我司的歐陽(yáng)技術(shù)來(lái)為大家講解大鼠TNF-a免疫組化試劑盒在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到的問(wèn)題及解析。
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 TNF-a 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 TNF-a與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗大鼠TNF-a，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，zui后加終止液硫酸，在450nm處測(cè)OD值，TNF-a濃度與OD值成正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中TNF-a濃度。
檢測(cè)程序
1. 加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。
2. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。
3. 每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。
8. 每孔加入100ul終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。
大鼠TNF-a免疫組化試劑盒注意事項(xiàng)
1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2. 洗滌過(guò)程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。
3. 板條開(kāi)封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。
4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。
5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！
以上是我公司歐陽(yáng)技術(shù)為各位老師講解的大鼠TNF-a免疫組化試劑盒在實(shí)驗(yàn)過(guò)程的遇到的問(wèn)題及解析，選擇上海恒遠(yuǎn)是您zui忠實(shí)的合作伙伴！